NY_T 3309-2018 肉类源性成分鉴定 实时荧光定性PCR法
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ID： |
B59D485358C94B16A2B2384FD3FD14FC |
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文件大小(MB)： |
1.68 |
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页数： |
13 |
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文件格式： |
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日期： |
2024-8-13 |
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ICS 67.120 UY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 3309—2018,肉类源性成分鉴定,实时荧光定性PCR法,Identification of animal-derived materials in meat-,Qualitative realtime PCR method,20187279 发布2019-06-01 实施,中华人民共和国农业农村部发布,NY/T 3309—2018,ー』ー —1—,刖 s,本标准按照GB/T L 1—2009给出的规则起草,本标准由农业农村部畜牧兽医局提出,本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC 274)归ロ,本标准起草单位:山东省农业科学院生物技术研究中心、山东省食品药品检验研究院,本标准主要起草人:步迅、张全芳、刘艳艳、范阳阳、霍胜楠、张卉、马德源、卞如如、陈杰、杨雪、李燕、,杨连群,I,NY/T 3309—2018,肉类源性成分鉴定 实时荧光定性PCR法,范围,本标准规定了对羊（绵羊、山羊）、狐狸、鸡、牛（普通牛、黄牛）、马、鸭、水貂、猪和大鼠9种动物源性,成分进行鉴定的实时荧光PCR法,本标准适用于生鲜肉、冷冻肉及曲制品中E（绵E、山下）、狐狸裡、牛（普通牛、黄牛）、马、鸭、水貂、,猪和大鼠9种动物源性成分叱却F,本方法检出限为1%。/ PUBし,2规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用,GB/T 668,日包括所有叫修改革,§对@'轟期セ版本适用于本文,用于作文心、^,GB/T 96.耳畛肉制品,GB/T 27^^实验戸质量控制劫魁丒品分村I物学检枷,农业部2网や公ギ 7-2016转基因动物及其产品堀八的加,上^^^■,3术语和定义,下列术用和‘,3. ! 圉,实时荧光PCR,性或定量分析。W,3.2,Ct 值 cycle tl,DNA,〇 丒,<7ヌ風1模板进行定,4原理,根据线粒体16S rDNA基,踰^爲^^^奶^^设计物种特异性探针,采,用TaqMan实时荧光PCR技术进?扩韶丒驛用1号及循环阈值,判定羊（绵羊、山,羊）、狐狸、鸡、牛（普通牛、黄牛）、马、鸭メ翹帰性成分,5试剂或材料,除另有规定外,仅使用分析纯试剂,5. 1 水:GB/T 6682,ー级,5.2 生理盐水:称取0. 85 g NaCl加20 mL水溶解,然后加水定容至100 mL, 103. 4 kPa蒸汽压（121℃）,条件下灭菌20 min,5.3 1 mol/L Tris-HCKpH 6. 4）溶液:称取 12. 1 g Tris 置于 100 mL 烧杯中,加入 80 mL 水,用浓 HC1,调节pH至6. 4,加水定容至100 mL,103. 4 kPa蒸汽压（121℃）灭菌20 min,室温保存待用,1,NY/T 3309—2018,5.4 10 mol/L NaOH溶液:称取80 g NaOH溶解于!60 mL水中,冷却至室温,再加水定容至200 mLo,5.5 0. 5 mol/ L EDTA-Na2（pH 8.0）溶液:称取 18.6 g EDTA-Na2 溶解于 70 mL 水中,用 10%的,NaOH溶液,调节pH至8. 〇,加水定容至100 mL,103.4 kPa蒸汽压（121℃）条件下灭菌20 min,室温保,存待用,5. 6 10%十二烷基磺酸钠（SDS）溶液:称取!0 g SDS溶解于80 mL灭菌水中,加热至完全溶解后,冷,却至室温,加水定容至100 mL,103. 4 kPa蒸汽压（121℃）灭菌20 min,室温保存待用,5.7 5 mol/L NaCl溶液:称取29. 22 g NaC!溶解于80 mL无菌水中,加水定容至100 mL,103. 4 kPa,蒸汽压（121℃）灭菌20 min,室温保存待用,5. 8 细胞裂解液（Lysis Buffer）:取 ! mol/L Tris-HCKpH 8.0）溶液 20 mL,0. 5 mol/L EDTA（pH,8. 〇）溶液 5 mL,5. 0 mol/L NaC! 溶液 10 mL,10% SDS 溶液 5 mL,加水定容至 100 mL,混匀,5. 9 20 mg/mL蛋白酶K溶液:称量0. 2 g蛋白酶冻干品,加无菌水溶解,加水定容至10 mL,分装后于,—20℃保存,5. 10 RNA酶溶液:将1 g冻干品RNA酶A溶解于6 mL无菌水中,于100℃加热!5 min,缓慢冷却至,室温,加水定容至10 mL,分装成小份存于ー20℃,5. 11氯仿+异戊醇混合液:将氯仿和异戊醇按照24+1的体积比例配制,5. 12 70%乙醇:量取70 mL无水乙醇,加入30 mL水,5. 13 TE缓冲液:将 〇. 5 mL 的 10 mmol/L Tris-HCKpH 8.0）溶液、0. 1 mL 的 0. 5mol/L EDTA（pH,8. 〇）溶液加入到50 mL容量瓶中,调pH 8. 〇,加水定容,103. 4 kPa蒸汽压（121℃）灭菌20 min,降至室,温,4℃保存备用,5. 14羊（绵羊、山羊）、狐狸、鸡、牛（普通牛、黄牛）、马、鸭、水貂、猪和大鼠9种动物源性实时荧光PCR,检测试剂盒试剂:2XTaqManMaster Mix,含有Taq DNA聚合酶（终浓度1 U/20山）、Mg2+（终浓度,2.01!!0!〇1/バ）、￡!^^5（终浓度0.2〇!11I〇1/.）。羊（绵羊、山羊）、狐狸、鸡、牛（普通牛、黄牛）、马、鸭、水,貂、猪和大鼠9种动物源性基因组DNA阳性标准品,6仪器设备,6. 1实时荧光定量PCR仪:4通道以上,6.……
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